Использование сайт-направленного мутагенеза для оптимизации свойств амилолитических ферментов

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время применение ферментных препаратов является неотъемлемой частью большинства технологических процессов пищевой промышленности. В частности, протеолитические и амилолитические ферменты используются в пивоварении, хлебопечении, мясомолочной и спиртовой промышленности, находят широкое применение в текстильной промышленности, в производстве детергентов, в качестве кормовых добавок в сельском хозяйстве, для переработки отходов мясной и птицеперерабатывающей промышленности. В спиртовой промышленности, перерабатывающей крахмалистое сырье, широко применяются ферменты гидролитического расщепления крахмала. Для этой цели используется зерновой солод и ферментные препараты микробного происхождения.
Применяемый в спиртовом производстве зерновой солод осуществляет гидролиз крахмала до сбраживаемых углеводов и является источником азотистого питания для дрожжей и при осахаривании крахмалистого сырья производит частичную деструкцию его клеточных стенок и белковых веществ. Однако при применении солода из-за ограниченной возможности создания достаточно высокой концентрации ферментов скорость осахаривания и протеолиза сырья остается низкой, что затрудняет интенсификацию процесса брожения.
Эффективная замена солода ферментами микробного происхождения является важной задачей. Опытом работы спиртовых заводов в последние 20 лет показано, что применение ферментных препаратов экономически оправдано: интенсифицируется процесс осахаривания крахмала, повышается степень использования сырья, стабилизируются технологические процессы. Все ферментные препараты, предназначенные для спиртовой промышленности можно подразделить на три основные группы по специфичности их воздействия на различные высокомолекулярные полимеры зернового сырья. Достаточно широко представлены ферментные препараты амилолитического действия, способствующие гидролизу крахмала. К ним относятся ферменты разжижающего, декстринирующего и осахаривающего воздействия на крахмал.
Эти ферменты можно...

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В данной работе было рассмотрены строение и функции амниотических ферментов, их физико-химические свойства, функции.
Особую роль в химии ферментов играет метод сайт-специфического (сайт-направленного) мутагенеза. Метод позволяет заменить одну аминокислоту в полипептидной цепи на любую другую из 20 природных аминокислот. Этим методом получена исключительно важная информация о роли той или иной аминокислоты в катализе. Существуют несколько подходов, позволяющих провести сайт-направленную замену аминокислоты.
Однако в последнее время широкое распространение получил метод сайт-направленного мутагенеза с использованием полимеразной цепной реакции. Суть метода заключается в том, что для полиме¬разной реакции используются праймеры, содержащие одну или несколько нуклеотидных замен, приводящих к замене соответ¬ствующего кодона в гене. Продуктом амплификации с использо¬ванием таких праймеров является фрагмент гена, содержащий замену кодона (аминокислотную замену в белке) в строго опре¬деленном положении.